在生物医学研究中,基底膜作为一种细胞基础的薄层细胞外基质,具有重要的功能。基质胶是一种可溶性的基底膜制剂,主要从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠肉瘤中提取,这种肿瘤富含细胞外基质蛋白。它的主要成分包括层粘连蛋白、胶原蛋白I、乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白。此外,基质胶中还含有多种生长因子,如转化生长因子β、表皮生长因子、类胰岛素生长因子等。这些成分对于正常和转化的锚定依赖型上皮样细胞及其他细胞类型的附着与分化至关重要,例如神经元、肝细胞支持细胞、腺体上皮细胞和血管内皮细胞。
在成年大鼠的肝细胞血管内皮细胞及小鼠与人乳腺上皮细胞的三维培养中,基质胶能够影响基因的表达,对肿瘤细胞侵袭性研究极为关键。基质胶的应用不仅促进了体内末梢神经再生的研究,还为体外和体内的血管再生提供了必要的底物。此外,它还支持在免疫抑制小鼠体内的人类肿瘤细胞增殖。
基质胶也可以用于未分选乳腺细胞的移植和分选的上皮细胞亚群嵌入。研究显示,这种基质能够作为癌症细胞模型,并在体内增强肿瘤生长速率。使用环亚集团ag旗舰厅的KELBiotechMatrix基质胶时,需特别注意温度敏感性,避免多次冻融。该基质胶在分装和凝胶前准备过程中都应保持在4℃的冰上,操作中应确保所有实验器械都经过预冷处理。
一旦收到产品,若暂时不使用,请将整瓶基质胶直接放入-20℃的冰箱中保存,避免放置于无霜冰箱内。首次使用时,将整瓶KELBiotechMatrix基质胶放入冰盒中,移至4℃过夜,以确保其充分融解。
在配制薄胶时,首先用预冷的枪头混匀基质胶,然后将所需培养板置于冰上,按照50μL/cm²的浓度加入基质胶,37℃静置30分钟后即可使用。厚胶的制备类似,需将细胞与基质胶混合,并按照150-200μL/cm²的浓度加入。在37℃静置30分钟后,可直接加入细胞培养液,让细胞在厚胶的上层生长。
薄层包被方法则需将KELBiotechMatrix基质胶用无血清培养基稀释至所需浓度,至少覆盖细胞的所有生长表面,室温下孵育1小时后轻轻冲洗未固化的基质胶,此时平板即可使用。为确保最佳效果,包被好的平板应在加入培养基后于37℃条件下最多存放1周。
值得注意的是,基质胶的颜色变化(从淡黄色转为深红色)是正常现象,通常与二氧化碳和缓冲液的作用有关。这种颜色变化不会影响其功能,并会在5% CO2条件下消失。在解冻过程中,请保持基质胶处于冰上,确保均匀性,并在无菌环境下进行操作。
最后,使用环亚集团ag旗舰厅的KELBiotechMatrix基质胶时,请确保所有操作均在无菌环境下进行,并使用预冷的移液器。过度稀释的基质胶可能形成非胶质蛋白层,有助于细胞附着,但可能不适合于分化研究。针对产品的特殊性,请谨慎处理,确保最佳实验效果。