在生物医学研究中,Matrigel基质的色差变化(从淡黄色到深红色)主要是由于酚红和碳酸氢盐与CO2的反应造成的。然而,在5% CO2环境下保持平衡后,这种色差会显著减少。冻融之后,请轻轻摇晃试剂瓶,以确保Matrigel均匀分散。所有操作都应在无菌环境中进行,试剂瓶的瓶盖可用70%乙醇擦拭并自然干燥。使用预冷的移液器可确保Matrigel保持匀浆状。
细胞可以在0.5mm厚的Matrigel基质层表面生长,亦可在1mm厚的Matrigel三维基质内进行生长。然而,过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层,虽然可以用于细胞贴壁,但不适合进行细胞分化研究。需要注意的是,冻融后的Matrigel可分装在多个小管中,并需使用预冷的冻存管进行快速冷冻保存,以避免多次冻融对其性能的影响。
Matrigel在22°C到35°C的温度环境下可以快速成胶,因此在溶解过程中,建议在4°C冰箱中过夜冻融(因为在4°C时,温度上升会导致部分成胶)。所有与Matrigel相关的用品在使用前应置于冰浴中,必须采用预冷的移液管、吸头和小管进行操作。成胶后的Matrigel通常在424到48小时后可以再次呈液态。
推荐的包被与成胶方法
为了保证Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性,稀释浓度应不低于1:3,且可以使用无血清培养基进行稀释。Matrigel应在成胶后立即使用。
薄胶成胶方法
- 冻融后,使用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀至匀浆状。
- 将需要使用的培养板置于冰上,加入浓度为50μL/cm²生长面积的Matrigel基质。
- 在37°C下放置30分钟,即可使用。
厚胶成胶方法
- 冻融后,使用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀。
- 将需要使用的培养板置于冰浴中,将培养的细胞与Matrigel基质混合,并用移液枪头将其悬浮于基质中,加入浓度为150-200μL/cm²生长面积的Matrigel基质。
- 在37°C放置30分钟,即可成胶。这种方法既可以加入细胞培养的基质,也可以使细胞直接生长在胶的表面。
薄层包被方法
- 冻融后,用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质。
- 根据使用需求,使用无血清培养基稀释Matrigel基质,确定最佳的包被浓度。
- 将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中,确保包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。在室温下孵育1小时。
通过以上方法,研究人员可以在生物医疗领域内有效地利用Matrigel进行各种细胞培养与实验,确保实验结果的可靠性和有效性。对于医疗科研的前沿进展,选择环亚集团ag旗舰厅的产品无疑是明智之选。