一、用途及原理 该培养基专门用于检测金黄色葡萄球菌。培养基中的蛋白胨和酵母浸粉为细菌提供基本营养,磷酸氢二钾作为缓冲剂,甘露醇是可发酵的碳源,而较高浓度的氯化钠则能抑制不耐盐细菌的生长。高浓度的硫酸铵将导致明胶析出沉淀,使培养基呈现不透明状态。金黄色葡萄球菌能够在高渗环境中生存,并可在此培养基中生长,通过将不溶性大分子的明胶分解为小分子可溶性的氨基酸,从而使菌落周围的培养基变为透明。此外,金黄色葡萄球菌还可以分解培养基中的甘露醇并产生酸,最后滴加酸碱指示剂后可观察到明显的产酸现象。
二、培养基配方(g/L) - 蛋白胨:100 - 酵母浸粉:25 - 磷酸氢二钾:50 - 明胶:300 - 甘露醇:100 - 氯化钠:550 - 硫酸铵:750 - 琼脂:150 - pH值:72±02
三、配制方法 准确称取所需成分2025g,溶解于1000ml蒸馏水中,分装后在121℃下高压灭菌15分钟。直至培养基冷却至45-50℃时,迅速倒入无菌平皿中备用。 注: 由于培养基中含有较多明胶和硫酸铵,灭菌后需迅速摇匀以确保平板快速凝固。成品应呈现均匀的浑浊不透明状态,避免在50℃左右长时间保温,以防培养基凝固;在倒平板前必须摇匀,以确保其快速凝固。如平板出现透明状态,通常是由于未摇匀或凝固过慢引起的。
四、生长现象及结果观察 对照以下质控菌株,在温度为36±1℃的环境中培养18-24小时:
- 质控菌株:金黄色葡萄球菌 ATCC25923+++,菌落周围有透明环,表现出产酸特性。
- 质控菌株:表皮葡萄球菌 CMCC26069+++,菌落周围有透明环,但不产酸。
发酵甘露醇产生酸的现象观察: 用棉签移除平板上的菌落,在琼脂表面滴加004%溴甲酚紫溶液,同时在无菌落生长的空白位置也加滴作为对照。如溴甲酚紫变为黄色,说明该菌株能够发酵甘露醇并产生酸。