左旋咪唑是一种合成的驱虫药,广泛应用于兽医学中,主要用于治疗由线虫引起的寄生虫感染。作为驱虫药物,它的作用机制主要是针对线虫的乙酰胆碱离子通道受体(Martin等)。除此之外,左旋咪唑在研究领域中的应用也十分广泛,尤其是在秀丽隐杆线虫的麻痹实验中。该药物能有效诱导线虫瘫痪,这一特性使其在神经元功能和肌肉生理学研究中具有重要价值。
为了更深入地探讨相关的毒理学实验,以下是一个使用左旋咪唑进行研究的示例。研究人员可以依据此示例,利用其他可溶性药物开展他们的毒性研究。所需材料包括:带盖的6孔板、NGM培养基、M9缓冲液、左旋咪唑原液(100mM水溶液)、同步成虫种群及WMicrotrackerArena设备。
实验简易操作步骤如下:
- 微孔板的制备:按照标准程序制备NGM;在加入盐和胆固醇后,将左旋咪唑立即加入55°C的NGM琼脂溶液中;
- 等待左旋咪唑片未接种OP50中;制备后两周内可使用,需在4°C的容器中保存;
- 在实验开始前,将模板降至室温以进行测定。
实验具体流程包括:
- 在NGM培养皿中培养同步的成虫种群(OP50);
- 使用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,转移至15毫升的无菌试管中;
- 让蠕虫静置,倒出上清液,注意不要打扰颗粒;
- 用5ml的M9缓冲液进行清洗,轻轻摇动或翻转管子。
- 重复前述步骤,倒出上清后加入3ml的M9缓冲液;
- 对三份样本进行计数,统计每10μl中的虫数,并计算平均值;
- 制备悬浮液,使其浓度为[35虫/10μl];
- 将10μl虫液转移至6孔板中;
- 利用WMicroTrackerARENA观察蠕虫的活动情况。
备注:实验至少需进行三次技术重复和两次生物重复。
实验数据表明,左旋咪唑对N2运动活性的抑制效应表现出明显的剂量依赖性,研究评估了不同浓度的左旋咪唑(如0µM(对照)、100µM和200µM)的治疗效果。在6孔板中,每孔选取35个年轻成虫N2,并在23℃下记录4小时的运动活性。数据为四个独立实验的平均值,显示重复实验的可靠性。
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